一(yi)般(ban)情況(kuang)下，瞬時轉(zhuan)(zhuan)染是將 DNA 導入真核細胞的(de)方式之一(yi)。在瞬時轉(zhuan)(zhuan)染中，重組 DNA 導入感染性強的(de)細胞系以獲得目的(de)基因暫時但高水平的(de)表達。

轉(zhuan)染的 DNA 不(bu)必整(zheng)合(he)到宿主染色體(ti)，可(ke)在比穩定轉(zhuan)染較短時(shi)間內（最多一(yi)周左右）收獲轉(zhuan)染的細胞，并對(dui)溶解產物中目的基因的表達進行檢(jian)測。

如果過表(biao)達基因用(yong)(yong)質粒，如果敲降用(yong)(yong)的(de)(de)是 siRNA(在 microRNA 實驗中(zhong)，過表(biao)達用(yong)(yong)的(de)(de)是 mimics，敲降用(yong)(yong)的(de)(de)是 inhibitor)。

通過(guo)瞬時轉(zhuan)染，將目的(de)基因(yin)敲降(jiang)或者(zhe)過(guo)表(biao)(biao)達（gain and loss 實驗），觀察下游靶基因(yin)的(de)表(biao)(biao)達情況，或者(zhe)細胞(bao)表(biao)(biao)型（phenotype）的(de)變化，例如凋亡，周期，增(zeng)殖，侵襲，轉(zhuan)移(yi)等。那該怎么做呢

lipofectamine2000（轉染試劑(ji)）（避(bi)光），Opti-MEMI減血清培養基（避(bi)光），目的基因(yin)的質粒或者siRNA（以siRNA為例），細(xi)胞(bao)，六孔板，培養基，以及一些細(xi)胞(bao)實驗所需的普(pu)通(tong)物品。

1）細(xi)胞(bao)(bao)(bao)接(jie)(jie)種(zhong)：轉染實驗前天接(jie)(jie)種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，各種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)平(ping)板密(mi)度(du)依(yi)據(ju)各種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)生長(chang)率和細(xi)胞(bao)(bao)(bao)形(xing)狀而定。進行轉染當天細(xi)胞(bao)(bao)(bao)密(mi)度(du)應(ying)達(da)到(dao)60%~80%覆蓋(gai)。

2）細胞(bao)轉染：1.一般六孔板(ban)液(ye)體(ti)每孔在 2ml 左右(you)，不宜太(tai)多(duo)，或者太(tai)少。取兩個 1.5mlEP 管(guan)，記為 A 管(guan)，B 管(guan)，每個 EP 管(guan)加(jia)入(ru) 250ul Opti-MEM I，然(ran)后 A 管(guan)加(jia)入(ru) 5-10ul lipofectamine 2000，B 管(guan)加(jia)入(ru) 100pM-200pM 的 siRNA（見買(mai)來的 siRNA 說明書(shu)），然(ran)后靜置 5min，混(hun)合(he)在一起，靜置 20min，用 AB 混(hun)合(he)液(ye)加(jia)入(ru)到 1.5ml 的無血清培養基 C 內(nei)，混(hun)勻；

2. 將六(liu)孔板里的(de)細胞的(de)液體(ti)吸出，用 PBS 清洗兩遍(bian)；

3. 將 ABC 混合液 2ml 加入(ru)六(liu)孔(kong)板中(zhong)；

4.4-6h 后(hou)換成(cheng)正常血清培(pei)(pei)養基（忌(ji)放(fang)抗生素），在培(pei)(pei)養箱內培(pei)(pei)養；

5.48h 后提取(qu) RNA 或者(zhe) 72h 提取(qu)蛋(dan)白，或者(zhe) 48h 后進(jin)行后續(xu)相關實(shi)驗。