細(xi)胞培養的(de)過(guo)程大概(gai)是這(zhe)樣(yang)的(de)：失敗—成功—體味—收獲—思(si)考—交流(liu)，你到了哪(na)個階段？不妨和(he)我們一起來(lai)看看養細(xi)胞的(de)那(nei)些事。

一、昆蟲細胞(bao)培養(yang)體會

養了快(kuai)一年(nian)的昆蟲(chong)細胞了， 而且最近又(you)在做昆蟲(chong)血液的原代培(pei)養， 積累(lei)了點點經(jing)驗， 說(shuo)出來大家共勉。

首先， 要廣泛閱讀細胞(bao)(bao)培(pei)養方面(mian)的專業(ye)書籍， 打造自己扎實(shi)的專業(ye)基礎， 為以后的操作做準備(bei)。 這方面(mian)的書有很多，「體外培(pei)養的原理與技(ji)術」， 薛慶善主編， 科學出版社(she)；「細胞(bao)(bao)實(shi)驗指南」，D.L. 斯佩克特，ets 著， 黃培(pei)堂(tang)等譯(yi)；「細胞(bao)(bao)培(pei)養」， 司徒鎮強等。

其次， 每種(zhong)細(xi)胞的(de)培(pei)養(yang)條(tiao)件都不相同， 別人的(de)經驗和書本上的(de) protocal 都只能作為(wei)參考， 真正重要的(de)是自己培(pei)養(yang)過程中的(de)不斷摸索， 這就需要對自己培(pei)養(yang)過程中細(xi)胞出現的(de)狀況作詳細(xi)記錄(lu)， 隨時總結。

再次， 培養(yang)要有極大(da)的(de)(de)耐(nai)心， 過(guo)程中的(de)(de)影(ying)響因素又(you)很多， 這又(you)是細活(huo)， 其過(guo)程需要考慮(lv)各種(zhong)影(ying)響因素， 當(dang)出現問題(ti)時一(yi)一(yi)加以排除， 找(zhao)到最(zui)佳解決(jue)方案。 我在這里沒有討論細胞培養(yang)的(de)(de)細節問題(ti)， 因為(wei)那樣的(de)(de)話是說不完的(de)(de)。

二、纖維細(xi)胞(bao)培(pei)養經驗

曾經在自己制作的無(wu)細胞(bao)(bao)真皮(pi)(pi)上養過成(cheng)(cheng)纖(xian)維細胞(bao)(bao)， 無(wu)細胞(bao)(bao)真皮(pi)(pi)是按照文獻(xian)的方法(fa)制作的， 把成(cheng)(cheng)纖(xian)維細胞(bao)(bao)接(jie)種到無(wu)細胞(bao)(bao)真皮(pi)(pi)上的方法(fa)也是按書(shu)和文獻(xian)中的方法(fa)。 可是很奇怪， 成(cheng)(cheng)纖(xian)維細胞(bao)(bao)怎么(me)都(dou)不(bu)長(chang)， 我重復了好(hao)多次， 結果(guo)都(dou)是失(shi)敗。

后來又做了對照， 同樣的條件， 一個平(ping)(ping)皿(min)中直接接種成纖維細胞(bao)， 另一個平(ping)(ping)皿(min)中放入(ru)無細胞(bao)真皮， 再接種成纖維細胞(bao)， 結果， 沒有無細胞(bao)真皮的平(ping)(ping)皿(min)中細胞(bao)長得很好。

這(zhe)樣說明不是細胞(bao)和(he)平(ping)皿的(de)問題， 那么問題在哪里(li)呢？ 我苦(ku)思了很久(jiu)， 覺得是不是無(wu)細胞(bao)真皮在處理的(de)過程中(zhong)用到(dao)了一些化學藥品， 對細胞(bao)的(de)生長(chang)有害。

可是在接種細胞以前我(wo)已經(jing)按文獻上的(de)方(fang)法將無細胞真皮用 DMEM 培養(yang)液浸(jin)(jin)泡(pao)了 48 小時， 在后(hou)來的(de)實驗(yan)中我(wo)就將浸(jin)(jin)泡(pao)的(de)時間(jian)延長， 并在中間(jian)每天換浸(jin)(jin)泡(pao)液一次， 經(jing)過 5 天的(de)浸(jin)(jin)泡(pao)以后(hou)， 成纖維細胞的(de)接種最終成功了。

這(zhe)份遲到的成功提醒我， 對于書和文獻(xian)上的東(dong)西， 不能(neng)不信(xin)， 也(ye)不能(neng)全信(xin)， 很多東(dong)西還得靠(kao)自己在實驗中摸(mo)索。

三、懸浮(fu)細胞培養經驗

（１） 無菌操作是(shi)一切技術的基(ji)礎(chu)， 切記此(ci)條。

（２）在(zai)細胞狀態好(hao)時， 乘勝追擊， 準備好(hao)一切所需(xu)要的細胞原(yuan)料。

實(shi)(shi)驗同時需要采用 FCM 檢測藥物干預后(hou)細(xi)胞(bao)周(zhou)期(qi)的(de)改變， 需要做 THC，Werstern Blot，RT－PCR 等時， 可(ke)(ke)以(yi)現將細(xi)胞(bao)處(chu)理好后(hou)， 根(gen)據不同的(de)實(shi)(shi)驗步驟， 保存細(xi)胞(bao)標本(ben)， 然后(hou)各個(ge)擊破， 這樣可(ke)(ke)以(yi)減少實(shi)(shi)驗時間。

如要收(shou)集(ji)不同濃度(du)點(dian)和時間點(dian)的標(biao)本， 細(xi)胞(bao)(bao)處理(li)后， 部(bu)分用來(lai)做(zuo)流式測周(zhou)期 （固定那步可以放(fang)置 －２０ 度(du)數日， 待(dai)標(biao)本收(shou)集(ji)全后一起檢(jian)測）。 部(bu)分用來(lai)細(xi)胞(bao)(bao)涂片(pian) （固定后， 可以放(fang) -20 度(du)數月， 本人曾放(fang)置 3 月沒影響）。

部(bu)分用(yong)來做 Werstern Blot（將細胞(bao)離心呈粉末狀置 -80 度(du)保存(cun)(cun)， 或(huo)者提取蛋白變性后(hou)保存(cun)(cun)， 粉末保存(cun)(cun)時間可(ke)達 2 月）。 部(bu)分用(yong)于提取 RNA 時， 可(ke)現加上 Trizol 混勻后(hou)， 置 -80 度(du)保存(cun)(cun)。

原料(liao)準(zhun)備好(hao)后， 在根據自(zi)己的時間進(jin)行合(he)理安排， 多出時間查閱文獻。

（３）在進行每個實驗時， 一(yi)定要找到該(gai)實驗的詳細的 Protocal， 一(yi)步一(yi)步踏(ta)踏(ta)實實的完成， 一(yi)般(ban)都(dou)會(hui)得到比較理想(xiang)的結果。

四、如(ru)何(he)防(fang)止(zhi)細胞污染

每個人都擔(dan)心細胞(bao)被污染， 每個人都有碰到自己的細胞(bao)被污染。

比較重要的(de)幾點如下：

東西一(yi)定要用自(zi)己的。 既不要借(jie)別人的， 也不要借(jie)給(gei)別人。 可(ke)能(neng)大家覺得比較自(zi)私(si)。 實際上還是(shi)很(hen)有好處的。 并(bing)不是(shi)每(mei)個人的操作都規范， 因(yin)此相互之間串著用， 很(hen)容(rong)易(yi)造成交叉污染(ran)。

我(wo)習慣口(kou)對口(kou)倒液體， 在(zai)倒前(qian)倒后都要在(zai)酒精(jing)燈(deng)上過一(yi)下。 自(zi)己認為比起用(yong)吸管吸更能(neng)很好(hao)的(de)防止污染。 步驟越簡單， 越能(neng)防止污染， 而且還能(neng)節省(sheng)很多吸管。

一次將所有(you)的(de)所需要(yao)試劑(ji)、工具放入工作臺。 不要(yao)做到(dao)半路， 又(you)出工作間拿東西， 這(zhe)樣增加了(le)污染的(de)機會。

整個操作(zuo)(zuo)要快、動(dong)作(zuo)(zuo)要輕、而且不要干其他(ta)的事情。

一般開紫外(wai)線照(zhao)射(she)臺的(de)時候， 就將培(pei)養基、酶、DTHANKS 液拿到室外(wai)讓它自然升溫。 這樣 40 分鐘后， 溫度也升上來了。 有很(hen)多人將他放到 37 度水(shui)(shui)浴(yu)鍋里加熱。 一定(ding)要(yao)注意水(shui)(shui)浴(yu)鍋的(de)衛生， 有的(de)常年(nian)不(bu)清洗， 里面(mian)很(hen)臟(zang)， 容易(yi)在外(wai)面(mian)瓶身(shen)上吸附大量細菌。 因此(ci)用它的(de)也一定(ding)要(yao)勤換水(shui)(shui)。 從(cong)水(shui)(shui)浴(yu)鍋拿出后， 最好找個毛巾插(cha)干上面(mian)的(de)水(shui)(shui)。

操作(zuo)前要洗手， 用(yong) 75%酒精搽(cha)手。用(yong)完操作(zuo)臺， 要打(da)掃衛生。

細(xi)胞(bao)(bao)(bao)要(yao)經常凍存， 一般只要(yao)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)狀(zhuang)(zhuang)態好就將細(xi)胞(bao)(bao)(bao)凍存起來。 細(xi)胞(bao)(bao)(bao)狀(zhuang)(zhuang)態差(cha)了， 扔掉， 重新復蘇。 這是一個必須養成的習慣。

轉自丁香園上(shang)各(ge)位站友的小心得