外源性DNA屬于(yu)生物(wu)(wu)制品(pin)工藝相關雜質，對其含量進(jin)行(xing)檢測可以確(que)認(ren)產品(pin)純化工藝是否合理，即(ji)能(neng)否有效去除外源DNA殘余；同時可確(que)認(ren)產品(pin)中雜質含量是否符合標準要(yao)求，該(gai)檢測值(zhi)是生物(wu)(wu)制品(pin)質量控制的(de)重(zhong)要(yao)參數(shu)之(zhi)一(yi)。

致癌性風險：現存的主(zhu)要(yao)致(zhi)癌(ai)機(ji)制是引入(ru)的顯(xian)性致(zhi)癌(ai)基(ji)因（如真核生物中廣(guang)泛(fan)存在(zai)的ras基(ji)因），通(tong)過直接轉化使得部分正常細胞(bao)分化為(wei)瘤(liu)性細胞(bao)。

免疫原性風(feng)險：細菌基(ji)因(yin)組富含的(de)CpG組分和未甲基(ji)化修飾的(de)序列(lie)會(hui)刺激非特異性(xing)免(mian)疫反應，增加免(mian)疫原性(xing)風險。

致(zhi)突(tu)變性風險：哺乳動物細胞基因組(zu)中含有(you)高(gao)拷(kao)貝數的轉座子，可(ke)通(tong)過(guo)異位重排改變(bian)基因組(zu)從而致(zhi)突變(bian)。

美國藥典：規定成品中(zhong)殘留(liu)DNA不高于10 ng/劑、長度不大于200 bp；

歐洲藥(yao)典：規定殘留(liu)DNA不超過10 ng/劑，具體可接受限度(du)需由(you)權威機(ji)構批準。

熒光染色法

應(ying)用熒(ying)光染料picogreen與雙鏈DNA結合形(xing)成復合物，在480 nm激發(fa)光、520 nm接(jie)收光下檢(jian)測，在一定的(de)DNA濃(nong)度(du)(du)范圍及熒(ying)光染料過(guo)量的(de)條件下熒(ying)光強(qiang)度(du)(du)與DNA濃(nong)度(du)(du)成正比，根據熒(ying)光強(qiang)度(du)(du)計算樣本中DNA殘留量。

該方法操作簡單、成本低廉、無需純化DNA；純DNA條件下靈敏度為0.2 ng/ml，基質中單鏈DNA和RNA對檢測影響較小，高濃度蛋白對檢測有干擾，故疫苗類產品經方法學驗證后是可以使用的，但不適用于高劑量的蛋白類制品；該方法對各類DNA具有通用性，無需對不同類型DNA設計特異性探針，但也因其特異性差易受環境中DNA污染。

定量PCR法

對(dui)(dui)外源(yuan)性(xing)(xing)DNA設計特異性(xing)(xing)引物和(he)熒光標(biao)記的(de)探(tan)針，以反(fan)應(ying)體系(xi)中熒光數值反(fan)映(ying)特異性(xing)(xing)擴增產物量(liang)，當反(fan)應(ying)過程中熒光強度達到預設的(de)閾值時，體系(xi)的(de)PCR循環數與該體系(xi)所含有的(de)起始(shi)DNA模板量(liang)的(de)對(dui)(dui)數呈(cheng)線性(xing)(xing)關(guan)系(xi)，依(yi)據DNA標(biao)準品測定樣本中外源(yuan)性(xing)(xing)DNA殘留(liu)量(liang)。

該方法序列特異性強、靈敏度高（fg級）、重現性好，是中國藥典、美國藥典和歐洲藥典均推薦的方法；靶標區域的選擇、引物和探針的特異性、DNA標準品質量對方法的靈敏度和準確度有較大影響，需針對不同外源性DNA開發特異的檢測體系和DNA標準品。

免(mian)疫(yi)閾(yu)值法

應(ying)用單鏈(lian)DNA結(jie)(jie)合(he)(he)蛋白(bai)捕獲變性的單鏈(lian)DNA，然(ran)后用尿素酶標記的抗-DNA抗體與結(jie)(jie)合(he)(he)的DNA反(fan)應(ying)，以尿素酶水解尿素后溶液pH變化反(fan)應(ying)體系中(zhong)DNA含量，經DNA標準品計(ji)算殘留DNA含量。

該方法靈敏度高（1-3 pg），有標準化操作流程，但依賴單鏈DNA結合蛋白和抗-DNA單克隆抗體兩種蛋白與DNA的結合，費用較高且需片段不小于600 bp。