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發布時間：2022-12-14 16:22 信息來源： 閱(yue)讀次(ci)(ci)數： 次(ci)(ci)
人間(jian)充質干細胞（human mesenchymal stem cells, hMSCs）是一類存在于不同組織間質或血管周圍、形態類似于成纖維細胞的成體干細胞，可在體外自我更新并具有成骨、成脂(zhi)、成軟(ruan)骨等分化(hua)能力。hMSCs具(ju)有(you)獨(du)特的(de)(de)、與治療疾病(bing)密切相關的(de)(de)生物學有(you)效(xiao)性(biological effectiveness)，因此已成為(wei)臨(lin)床研(yan)究中發展最為(wei)迅速(su)的(de)(de)一類干細胞，具(ju)有(you)廣泛的(de)(de)臨(lin)床應用價值(zhi)。
hMSCs質量屬性
臨床應用的hMSCs應具有四類質量屬性：基(ji)本細胞(bao)生物學屬(shu)性，微生物學安(an)全性，生物學安(an)全性和生物學有效性。其(qi)中生(sheng)物學(xue)有(you)效(xiao)(xiao)性(xing)與hMSCs臨床(chuang)(chuang)治療效(xiao)(xiao)應(ying)密(mi)切相(xiang)關，是(shi)(shi)臨床(chuang)(chuang)前研究階段用(yong)于預測臨床(chuang)(chuang)治療效(xiao)(xiao)應(ying)，是(shi)(shi)現(xian)階段乃至(zhi)未來決定hMSCs臨床(chuang)(chuang)轉化(hua)(hua)是(shi)(shi)否能(neng)成功的(de)重要質(zhi)量屬(shu)(shu)性(xing)。不同組(zu)織來源的(de) hMSCs生(sheng)物學(xue)有(you)效(xiao)(xiao)性(xing)質(zhi)量屬(shu)(shu)性(xing)，可歸類為誘導分(fen)化(hua)(hua)功能(neng)、免疫調控(kong)能(neng)力及組(zu)織再生(sheng)功能(neng)，而每一類別中又含有(you)細化(hua)(hua)的(de)內容(rong)(或(huo)質(zhi)量屬(shu)(shu)性(xing))。
體(ti)外評價(jia)(jia)hMSCs細胞向不同譜(pu)系(xi)的分化(hua)能力是hMSCs生物學有效(xiao)性(xing)質(zhi)量評價(jia)(jia)的關鍵質(zhi)量屬(shu)性(xing)，接下來就hMSCs的生(sheng)物學有效性評價中的多向分化(hua)潛能作詳細介紹(shao)。
hMSCs多向分化潛能及其檢測方法
hMSCs在特定體外誘導分化培養條件下，具有向內、中、外胚層不同細胞系分化的潛能。在體外質量評價實驗中，可以通過特定的誘導條件將hMSCs向特定功能細胞分化，進而運用不同檢測技術對分化細胞的相關生物學特性或功能進行評價。目前普遍接受由ISCT于2006年首(shou)次提出(chu)的(de)以成骨(gu)、成脂、成軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞誘(you)導分化能力的(de)評(ping)價方法。
一、 hMSCs成骨細胞誘(you)導分化：
在體外培養條件下，經過特定誘導條件使hMSCs分化發育為成骨細胞。通常將這個分化過程劃分為細胞增殖期、分化早期、分化中晚期三個階段。hMSCs 在貼壁后就開始進入細胞增殖階段，以DNA復制和組蛋白合成為特征。分化早期則以堿性磷酸酶活性升高、I型膠原分泌為特征，同時還伴有細胞增殖抑制。分化中晚期主要以鈣離子的沉積為特征。故常通過檢測鈣(gai)離子沉淀“鈣(gai)結節”的(de)量來表(biao)示成(cheng)骨分化的(de)強弱(ruo)。
茜素紅(hong)S是橙黃色(se)的(de)(de)(de)針狀體(ti)，由茜素經發(fa)煙硫酸(suan)磺化，然后轉變為鈉鹽(yan)制得。屬一種蒽(en)醌(Anthraquinone)類(lei)的(de)(de)(de)衍生物，是茜素磺酸(suan)鈉鹽(yan)，它能與(yu)鈣鹽(yan)以鰲(ao)和方式形(xing)成(cheng)(cheng)橘紅(hong)色(se)復合物，用(yong)以識(shi)別組織細胞的(de)(de)(de)鈣鹽(yan)成(cheng)(cheng)分。經茜素紅(hong)(alizarin red)染色(se)呈陽性，提示成(cheng)(cheng)骨誘導分化后細胞內可形(xing)成(cheng)(cheng)礦化基(ji)質。
二、 hMSCs成脂(zhi)細胞誘導分(fen)化：
人(ren)和哺乳動(dong)物(wu)體內(nei)的(de)脂(zhi)(zhi)肪(fang)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)可(ke)以(yi)分(fen)(fen)(fen)(fen)為(wei)白(bai)(bai)色脂(zhi)(zhi)肪(fang)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)和棕色脂(zhi)(zhi)肪(fang)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)，兩種(zhong)脂(zhi)(zhi)肪(fang)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)的(de)細(xi)胞中(zhong)均含有(you)脂(zhi)(zhi)肪(fang)，但(dan)是(shi)他們在(zai)分(fen)(fen)(fen)(fen)布位置(zhi)和結構功能(neng)上有(you)所區別。白(bai)(bai)色脂(zhi)(zhi)肪(fang)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)普(pu)遍分(fen)(fen)(fen)(fen)布在(zai)皮下組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)和內(nei)臟周圍(wei)，主要(yao)起(qi)能(neng)量(liang)倉庫的(de)作用(yong)，將多余的(de)能(neng)量(liang)以(yi)脂(zhi)(zhi)肪(fang)的(de)形式(shi)儲存(cun)起(qi)來。棕色脂(zhi)(zhi)肪(fang)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)主要(yao)分(fen)(fen)(fen)(fen)布在(zai)頸部兩側(ce)、背部上側(ce)、鎖骨附近和脊柱周圍(wei)，其細(xi)胞內(nei)含有(you)大量(liang)線粒體，可(ke)以(yi)將食物(wu)中(zhong)的(de)能(neng)量(liang)轉化為(wei)熱能(neng)。
hMSCs在相關誘導分化培養基培養14～28 d后，經油紅O(oil red 0)染色為陽性，根據脂肪組織細胞的特點：細(xi)胞(bao)漿中含有脂(zhi)肪(fang)滴(di)(di)，可以(yi)通過油紅O對細(xi)胞(bao)中脂(zhi)肪(fang)滴(di)(di)染色。說明(ming)分化的細(xi)胞(bao)內形成(cheng)脂(zhi)滴(di)(di)。
油(you)紅(hong)O（蘇(su)丹紅(hong)）是一種脂(zhi)(zhi)溶性偶(ou)氮染料，能特異性地使組(zu)織(zhi)和(he)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)內(nei)中(zhong)性甘(gan)油(you)三(san)脂(zhi)(zhi)、脂(zhi)(zhi)質(zhi)以及(ji)脂(zhi)(zhi)蛋白(bai)等染色。油(you)紅(hong) O 配(pei)成染色液用于染色時，可以通過相似相溶的原理使組(zu)織(zhi)或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)內(nei)的脂(zhi)(zhi)滴(di)著紅(hong)色，可用于分(fen)析組(zu)織(zhi)或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)樣本中(zhong)的脂(zhi)(zhi)質(zhi)分(fen)布情(qing)況。
三、 hMSCs成軟骨細胞(bao)誘導分(fen)化：
具有成軟骨分化能力的hMSCs細胞在誘導培養過程中，可以自發收縮聚集形成細胞微球，并逐漸形成具有一定硬度和彈性并呈白色外觀的軟骨樣子組織。該組織(zhi)經阿利新藍染色呈陽性。（在間充質干細胞誘導分化為軟骨細胞后，細胞可以合成并分泌大量細胞外基質，其中包括富含透明質酸的糖胺聚糖，可以被阿利新藍染成藍色。）伴隨軟骨細胞分化，Ⅱ型膠原等軟骨細胞特定基因表達水平會顯著上調，因此可利用在軟骨分化條件下，hMSCs成細胞球能力、形成軟骨組織形態能力、番紅O或阿新藍染色及軟骨特定基因表達上調情況綜合判斷hMSCs成軟骨細胞分化能力。
這(zhe)種(zhong)基于三維細胞培(pei)養、形態學觀察和阿利新藍染色的檢測方法可以提供相(xiang)對明(ming)確(que)的成(cheng)軟骨(gu)細胞分化能力的信息(xi)。
相關法規指導
后臺回復“干細胞質量控制”，獲取相(xiang)關指導文件。
武漢珈創生物相關服務
武(wu)漢珈(jia)創(chuang)(chuang)生(sheng)(sheng)物(wu)技術股(gu)份有限公司，創(chuang)(chuang)建于(yu)2011年，是一家集生(sheng)(sheng)物(wu)技術服務(wu)與研(yan)發(fa)為一體的高新(xin)技術企業，專(zhuan)注于(yu)為生(sheng)(sheng)物(wu)藥品/制(zhi)品的生(sheng)(sheng)產企業及(ji)(ji)研(yan)發(fa)機構(gou)提供各類(lei)細(xi)(xi)胞（含重組細(xi)(xi)胞、干細(xi)(xi)胞、免(mian)疫細(xi)(xi)胞等）及(ji)(ji)原輔(fu)料的質量檢測、病毒清除工藝驗證技術服務(wu)。
質量檢測服務
武漢珈創生(sheng)物可按相關法規或者指導文件提供干細胞(bao)治療產(chan)品(pin)的各個(ge)生(sheng)產(chan)環(huan)節的質量檢測服務，包括(kuo)：
基本生物學屬性檢測
細胞(bao)鑒(jian)別、細胞(bao)活性(xing)檢(jian)測(ce)、種屬間細胞(bao)污染的檢(jian)測(ce)、染色體核型分(fen)析；
微生物學安全性檢測
無(wu)菌檢(jian)測、支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測，確保(bao)產(chan)品無(wu)微生物污(wu)染(ran)或代謝產(chan)物污(wu)染(ran)；
生物學安全性檢測
成(cheng)瘤(liu)性和致瘤(liu)性檢測、異常免(mian)疫反應檢測、殘留物的檢測；
生物學有效性評價
多向分化功能的評價(jia)(jia)、免疫調控功能的評價(jia)(jia)、hMSCs組(zu)織(zhi)再生功能的評價(jia)(jia)
干細胞放行快檢
珈創生物自主研發(fa)的(de)放行(xing)快檢(jian)(jian)技(ji)(ji)術(shu)，可在(zai)6小時內(nei)完成(cheng)，涵蓋細菌(jun)、真菌(jun)和支原體快檢(jian)(jian)技(ji)(ji)術(shu)，且技(ji)(ji)術(shu)方法已成(cheng)熟，經過了上(shang)百次(ci)驗證(zheng)。
定制化服務
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