1. 新建細胞(bao)系(xi)/株以及(ji)新型細胞(bao)基質。

2. 某些傳代(dai)細胞(bao)已證明(ming)在一(yi)定(ding)代(dai)次內不具有(you)成瘤性，而超過一(yi)定(ding)代(dai)次則(ze)具有(you)成瘤性（如Vero）。

3. 用(yong)于疫苗生產的細胞系/株(zhu)應進行成(cheng)瘤性檢查，但當未經遺傳修(xiu)飾的二(er)倍體細胞被證(zheng)明無成(cheng)瘤性后，可以不作為常規(gui)檢查要求(qiu)。

注(zhu)：已證明具有成瘤性的傳代細胞（如BHK21，CHO，C127等），或細胞類型屬成瘤性細胞（如雜交瘤細胞等），用于生產治療性產品時可以不再做成瘤性檢查。

目前使用比較廣泛的成瘤性檢查方法有動物接種法(fa)（體內）和軟(ruan)瓊脂克隆形成實(shi)驗(yan)（體外）。其中，體內法為評價的標準，但對某些細(xi)胞(bao)而言(yan)，體外法的結果也可以作為細(xi)胞(bao)成瘤(liu)(liu)性檢(jian)查的參考，尤其是低代次、在動物體內無成瘤(liu)(liu)性的傳(chuan)代細(xi)胞(bao)系(xi)。

將待檢(jian)測細(xi)胞(bao)(bao)接種(zhong)于皮(pi)下(xia)或(huo)(huo)者(zhe)肌(ji)肉內注射(she)。至(zhi)少觀察(cha)16周接種(zhong)部位是(shi)否(fou)有(you)(you)進行(xing)性(xing)結節形(xing)(xing)成(cheng)，對(dui)出現的結節開始消退(tui)的動(dong)物(wu)，應在(zai)觀察(cha)期(qi)末(mo)處死(si)。不能(neng)形(xing)(xing)成(cheng)進行(xing)性(xing)結節的細(xi)胞(bao)(bao)，不視為具有(you)(you)成(cheng)瘤(liu)性(xing)。通(tong)常用 HeLa 或(huo)(huo) HeLa S3細(xi)胞(bao)(bao)或(huo)(huo)其他已知(zhi)成(cheng)瘤(liu)性(xing)細(xi)胞(bao)(bao)作陽性(xing)對(dui)照，且對(dui)照組至(zhi)少設(she)10只動(dong)物(wu)，試(shi)驗(yan)才視為有(you)(you)效。在(zai)觀察(cha)期(qi)末(mo)，處死(si)所有(you)(you)動(dong)物(wu)，對(dui)注射(she)部位及其他部位 (如心臟、肺、肝、脾、腎、腦及局部淋巴結)進行(xing)觀察(cha)和組織病理學(xue)檢(jian)查，判斷是(shi)否(fou)有(you)(you)接種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)增生(sheng)，進一步(bu)判定(ding)接種(zhong)細(xi)胞(bao)(bao)是(shi)否(fou)形(xing)(xing)成(cheng)腫(zhong)瘤(liu)或(huo)(huo)有(you)(you)轉(zhuan)移瘤(liu)。

使用低熔點(dian)瓊脂模擬細胞(bao)在(zai)體(ti)內的微(wei)環境培養(yang)細胞(bao)，通常(chang)使用其它已知(zhi)具有成瘤性(xing)的細胞(bao)作為陽(yang)(yang)性(xing)對(dui)照，對(dui)照組與實驗組同步操作。常(chang)規培養(yang)3周左右，培養(yang)過程中(zhong)可(ke)視情況(kuang)適當地補充細胞(bao)培養(yang)液(ye)，直到陽(yang)(yang)性(xing)組在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下明顯(xian)觀察到大量細胞(bao)集落，培養(yang)終止(zhi)。使用4%多聚(ju)甲醛固定，結晶紫染色，在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀察并拍照記(ji)錄。

歐洲EMA、美國FDA以及WHO針對干細胞、體細胞、成體干細胞、轉基因細胞、基因治療產品以及生產用動物細胞培養物等發布了多項指導原則。EMA在《人體細胞醫療產品的指導原則》中表示“如果可以預(yu)見細胞(bao)轉化風險(xian)則應該展開成瘤性研究，重(zhong)點(dian)檢測其增殖能(neng)力以及染(ran)色(se)體(ti)完整性”，在《干細胞醫療產品反思文件》中提到“多能(neng)干細(xi)胞和體干細(xi)胞都存(cun)在腫(zhong)瘤(liu)形成(cheng)風險，培養條件可(ke)能(neng)會嚴重影響干細(xi)胞的基因組的不穩(wen)定，延長細(xi)胞培養有助于評估成(cheng)瘤(liu)性(xing)和染色(se)體穩(wen)定性(xing)”。

FDA指導原則認為控制hESC衍生的(de)細胞(bao)產品中未分(fen)化(hua)的(de)ESC或其他細胞(bao)雜(za)質水平是成(cheng)瘤(liu)性(xing)風(feng)險評(ping)價的(de)主(zhu)要方面(mian)，采用細胞(bao)增(zeng)殖測定法(fa)和(he)軟瓊脂集(ji)落形成(cheng)法(fa)測定惡性(xing)轉(zhuan)化(hua)細胞(bao)，以(yi)檢測最終產品中的(de)雜(za)質細胞(bao)是否超過了最小腫(zhong)(zhong)瘤(liu)產生劑量。FDA還重點討論了臨床前實驗物(wu)種的(de)選擇和(he)動物(wu)模型(xing)的(de)預測能(neng)力，以(yi)評(ping)估植(zhi)入細胞(bao)到(dao)達移(yi)植(zhi)部(bu)位微環(huan)境中是否形成(cheng)腫(zhong)(zhong)瘤(liu)，以(yi)及引起宿主(zhu)細胞(bao)和(he)植(zhi)入細胞(bao)在各(ge)組織(zhi)器(qi)官中發(fa)生腫(zhong)(zhong)瘤(liu)轉(zhuan)化(hua)的(de)風(feng)險。