前言

近年來，DNA 重組技(ji)術(shu)在醫藥領域的(de)(de)飛速發展，使得(de)采用哺乳動物(wu)細胞表達系統的(de)(de)生(sheng)物(wu)制品(pin)藥物(wu)逐漸成為主流，而(er)對于此技(ji)術(shu)的(de)(de)主要(yao)(yao)原材料(liao)---細胞系和(he)其他原料(liao)的(de)(de)檢(jian)定要(yao)(yao)求也日(ri)趨嚴格。

隨著(zhu)質(zhi)(zhi)量(liang)(liang)源(yuan)于(yu)設計（QbD）理(li)念越來越廣(guang)泛的(de)(de)(de)得到認可，意(yi)味著(zhu)僅僅依(yi)靠檢測終產品(pin)(pin)(pin)來保證藥品(pin)(pin)(pin)質(zhi)(zhi)量(liang)(liang)是遠遠不(bu)夠(gou)的(de)(de)(de)，這個理(li)念和生物制(zhi)品(pin)(pin)(pin)一(yi)直堅持的(de)(de)(de)全(quan)過程質(zhi)(zhi)量(liang)(liang)控制(zhi)的(de)(de)(de)基本(ben)方針是基本(ben)一(yi)致(zhi)的(de)(de)(de)。基于(yu)這一(yi)理(li)念，把控生產用細胞的(de)(de)(de)構建(jian)、鑒定，以及細胞庫的(de)(de)(de)建(jian)立(li)和管理(li)，能夠(gou)從源(yuan)頭上保證產品(pin)(pin)(pin)質(zhi)(zhi)量(liang)(liang)的(de)(de)(de)穩定。

2015年(nian)版(ban)《中(zhong)國藥典》三(san)部(bu)“生(sheng)(sheng)物(wu)制(zhi)品生(sheng)(sheng)產用動物(wu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)制(zhi)備(bei)及檢定(ding)規程”中(zhong)，對(dui)于生(sheng)(sheng)產用細(xi)(xi)胞(bao)(bao)基(ji)質(zhi)的質(zhi)量(liang)控(kong)制(zhi)提出了要求。對(dui)于生(sheng)(sheng)產用細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，需要建(jian)立(li)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)庫(ku)，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)庫(ku)的建(jian)立(li)可為生(sheng)(sheng)物(wu)制(zhi)品的生(sheng)(sheng)產提供檢定(ding)合(he)格(ge)，質(zhi)量(liang)相同(tong)，能持續(xu)穩定(ding)傳代的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)。在細(xi)(xi)胞(bao)(bao)庫(ku)建(jian)立(li)之后，應至少對(dui)MCB和(he)生(sheng)(sheng)產終末細(xi)(xi)胞(bao)(bao)進行(xing)一次(ci)全面(mian)檢定(ding)。當生(sheng)(sheng)產工藝發生(sheng)(sheng)改變時，還應重新對(dui)生(sheng)(sheng)產終末細(xi)(xi)胞(bao)(bao)進行(xing)全檢。細(xi)(xi)胞(bao)(bao)檢定(ding)主(zhu)要包括以下幾個方面(mian)：細(xi)(xi)胞(bao)(bao)鑒別、外源(yuan)因子和(he)內源(yuan)因子的檢查、成瘤性/致瘤性檢查等。細(xi)(xi)胞(bao)(bao)檢定(ding)的基(ji)本(ben)要求見下表：

細(xi)胞庫的(de)(de)檢(jian)定，對于保證細(xi)胞庫的(de)(de)質量和(he)為后續工藝提供穩定的(de)(de)合格的(de)(de)細(xi)胞尤為必要(yao)，此(ci)部分的(de)(de)工作對生(sheng)物制品產(chan)品而言非常重要(yao)。在進行項目選(xuan)擇時，可參考《中國(guo)藥典》三部“生(sheng)物制品生(sheng)產(chan)用動物細(xi)胞制備及檢(jian)定規(gui)程(cheng)”。

大多數生物制品產(chan)品是(shi)有(you)活性的，無(wu)(wu)法采用傳統的終端滅菌(jun)工藝，因此(ci)在細(xi)胞庫建立和生產(chan)的各個階段(duan)都需要(yao)對無(wu)(wu)菌(jun)性進行檢定，其中分枝桿菌(jun)的檢查是(shi)2015年版藥(yao)典新增(zeng)項目，檢定時應關注(zhu)。

支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)的(de)污染則是基(ji)礎研究和(he)工業(ye)生(sheng)(sheng)產中的(de)常見(jian)問題，據報道(dao)可能有高達87%的(de)細胞(bao)系發生(sheng)(sheng)過支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)污染，支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)在光學(xue)顯微鏡下不可見(jian)，一(yi)般不引起培養物渾濁，因此支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)污染一(yi)般很難察覺，支(zhi)(zhi)原(yuan)體(ti)(ti)檢測也十分必要。

感染性病(bing)(bing)毒(du)(du)顆粒污染生(sheng)物(wu)(wu)(wu)制(zhi)品(pin)和生(sheng)物(wu)(wu)(wu)制(zhi)品(pin)衍生(sheng)產(chan)品(pin)是(shi)被廣泛關注的(de)(de)安全問題，對于(yu)細(xi)胞(bao)表達系(xi)統(tong)可能帶來的(de)(de)病(bing)(bing)毒(du)(du)污染問題世(shi)界各國均十分(fen)重(zhong)視，ICH Q5A中規定(ding)了相應的(de)(de)技術要求（ICH關于(yu)“生(sheng)物(wu)(wu)(wu)技術產(chan)品(pin)的(de)(de)病(bing)(bing)毒(du)(du)安全性評價”）。綜合以上因素對于(yu)病(bing)(bing)毒(du)(du)因子的(de)(de)檢查應該盡量充分(fen)全面。內外(wai)源病(bing)(bing)毒(du)(du)的(de)(de)檢定(ding)應充分(fen)考慮細(xi)胞(bao)的(de)(de)特性，傳代歷史(shi)，培養(yang)過(guo)程等因素。例如：

作(zuo)為(wei)單克隆抗(kang)體等(deng)生(sheng)物制劑最常用的生(sheng)產用細(xi)(xi)胞(bao)(bao)系，中國倉鼠(shu)卵巢細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(CHO)和小鼠(shu)NS0和Sp2/0等(deng)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)系，由于其細(xi)(xi)胞(bao)(bao)來(lai)源(yuan)的供(gong)體或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)取(qu)材的原因，需(xu)要(yao)關(guan)注其特定種屬（鼠(shu)源(yuan)）病(bing)毒的檢查。

對(dui)于細(xi)胞(bao)建(jian)庫過程中使用過動(dong)物來源的原料：如牛血清，或胰蛋白酶（豬），還需對(dui)特定(ding)的動(dong)物來源的病(bing)毒進(jin)行檢定(ding)。

另外，2015版《中國藥(yao)典》三部(bu)的(de)(de)主要(yao)變化還有，新(xin)增(zeng)了(le)“人用(yong)重(zhong)組DNA蛋白制品(pin)總(zong)(zong)(zong)論(lun)(lun)”和“單克隆抗體類生(sheng)(sheng)物(wu)治(zhi)療藥(yao)物(wu)總(zong)(zong)(zong)論(lun)(lun)”這兩個總(zong)(zong)(zong)論(lun)(lun)的(de)(de)制定(ding)(ding)為生(sheng)(sheng)物(wu)制品(pin)藥(yao)物(wu)的(de)(de)研發和質量(liang)控制提(ti)(ti)供了(le)通用(yong)的(de)(de)指導原則。其中“人用(yong)重(zhong)組DNA蛋白制品(pin)總(zong)(zong)(zong)論(lun)(lun)”對(dui)(dui)于(yu)連續(xu)培(pei)養(yang)的(de)(de)生(sheng)(sheng)產(chan)方(fang)式，要(yao)求應對(dui)(dui)收獲(huo)階(jie)段的(de)(de)微生(sheng)(sheng)物(wu)污染進行(xing)(xing)常規檢(jian)測；“單克隆抗體類生(sheng)(sheng)物(wu)治(zhi)療藥(yao)物(wu)總(zong)(zong)(zong)論(lun)(lun)”則提(ti)(ti)出：細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)和收獲(huo)可采(cai)用(yong)限定(ding)(ding)細(xi)(xi)胞傳(chuan)(chuan)代(dai)，單次(ci)收獲(huo)產(chan)物(wu)的(de)(de)方(fang)式；也可采(cai)用(yong)限定(ding)(ding)細(xi)(xi)胞傳(chuan)(chuan)代(dai)時間，連續(xu)傳(chuan)(chuan)代(dai)多次(ci)收獲(huo)的(de)(de)方(fang)式。而對(dui)(dui)于(yu)兩種方(fang)式的(de)(de)收獲(huo)階(jie)段都有相關的(de)(de)規定(ding)(ding)，每次(ci)收獲(huo)后(hou)均應檢(jian)測抗體含量(liang)，細(xi)(xi)菌內毒素及支原體。對(dui)(dui)于(yu)限定(ding)(ding)細(xi)(xi)胞傳(chuan)(chuan)代(dai)次(ci)數(shu)的(de)(de)生(sheng)(sheng)產(chan)方(fang)式，需要(yao)采(cai)用(yong)適(shi)當的(de)(de)體外方(fang)法，對(dui)(dui)3次(ci)收獲(huo)物(wu)進行(xing)(xing)外源(yuan)病(bing)毒的(de)(de)檢(jian)測。