上期推文《》中提到，細胞“體檢”的第一步是進行“細胞鑒定”，也就是鑒別細胞的身份，證明“該細胞是該細胞”，沒有被誤認，也沒有出現交叉污染的情況。

細胞是(shi)生產(chan)抗(kang)體(ti)、蛋(dan)白藥物(wu)、疫苗(miao)的(de)“母體(ti)”，也是(shi)進行(xing)細胞治療(liao)(liao)、基因治療(liao)(liao)的(de)基礎(chu)。細胞的(de)質量優劣、特(te)性穩定與否(fou)、種屬(shu)差異程度的(de)影響貫穿生物(wu)制品的(de)研(yan)發、生產(chan)及臨床應(ying)用的(de)全過程。

如因使用了交(jiao)叉污染或錯誤(wu)辨識的細胞(bao)會導(dao)致(zhi)研究結論錯誤(wu)、結果不(bu)可重復(fu)、臨床細胞(bao)治療失敗等(deng)，給研究者、藥品生產者等帶來不可估量的損失，甚而威脅到患者的生命健康。

為此，各種(zhong)雜志如Nature、Science、Cell等曾多(duo)次(ci)發出(chu)呼吁(yu)，要求研究者對(dui)細(xi)胞進(jin)行(xing)鑒定。

細胞培養中可以使用許多方法對交叉污染進行鑒定，藥典規定應至少選擇下述一種或幾種方法對細胞進行種屬和細胞株間及專屬特性的鑒別。

通過觀察細(xi)胞形態，初步判斷細(xi)胞生物屬(shu)性，如細(xi)胞生長狀態等，以下(xia)為常見的幾種(zhong)細(xi)胞形態：

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STR（Short Tandem Repeat，短串聯重復序列） 基因位點由長度為 3~7 個堿基對的短串聯重復序列組成，這些重復序列廣泛存在于人類基因組中，可作為高度多態性標記，被稱為細胞的 DNA 指紋，其可通過一定的計算方法，即可根據所得的 STR 分型結果與專業的細胞 STR 數據庫比對，從而推算出樣品所屬的細胞系或可能的交叉污染的細胞系名稱。

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同工酶(isoenzyme)是指蛋(dan)白(bai)的(de)分子結構(gou)、理化(hua)性(xing)(xing)質(zhi)乃至免疫(yi)學性(xing)(xing)質(zhi)不同，但是催化(hua)的(de)化(hua)學反應相同的(de)一組(zu)酶。這類酶存在于生物的同一種屬或同一個體的不同組織、甚至是不同的細胞中。

同工酶的(de)結構差異(yi)在(zai)一(yi)定條件下能在(zai)電泳(yong)上(shang)區(qu)分出來，常用于細胞(bao)系種屬鑒定，通(tong)常以乳(ru)酸(suan)(suan)(suan)脫(tuo)氫(qing)酶（LD）、嘌呤核苷磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)化酶（NP）、葡萄糖-6-磷(lin)酸(suan)(suan)(suan)脫(tuo)氫(qing)酶（G6PD）、蘋(pin)果酸(suan)(suan)(suan)脫(tuo)氫(qing)酶（MD）等幾種酶譜為常用分析(xi)指(zhi)標(biao)。

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染色體核型分析是以分(fen)裂(lie)中(zhong)期(qi)的(de)染(ran)(ran)色(se)(se)體(ti)(ti)為研(yan)究對(dui)象，根據染(ran)(ran)色(se)(se)體(ti)(ti)的(de)長(chang)(chang)度、著絲點位置、長(chang)(chang)短臂(bei)比(bi)例、隨(sui)體(ti)(ti)的(de)有無(wu)等(deng)特征，并借助(zhu)顯帶(dai)技術對(dui)染(ran)(ran)色(se)(se)體(ti)(ti)進行分(fen)析、比(bi)較(jiao)、排(pai)序和(he)編(bian)號，根據染(ran)(ran)色(se)(se)體(ti)(ti)結(jie)構(gou)和(he)數目的(de)情況來進行鑒別。核型分析可以為細胞遺傳分類、物種間親緣的關系以及染色體數目和結構變異的研究提供重要依據。

顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)技術(shu)指(zhi)通過特殊(shu)的(de)(de)染(ran)色(se)方法(fa)使染(ran)色(se)體(ti)的(de)(de)不(bu)同區域著色(se)，使染(ran)色(se)體(ti)在光鏡下呈(cheng)現(xian)出明暗相(xiang)間的(de)(de)帶(dai)(dai)紋。常用(yong)的(de)(de)三大顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)技術(shu)包括：G顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)、Q顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)和R顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)。其中，G顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)運用(yong)最廣泛，指(zhi)標本經(jing)(jing)胰蛋白酶(mei)(mei)處理后(hou)，應用(yong)Giemsa染(ran)色(se)，隨后(hou)鏡檢、分析；R顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)（R-bandin）指(zhi)中期染(ran)色(se)體(ti)不(bu)經(jing)(jing)鹽酸水解或不(bu)經(jing)(jing)胰酶(mei)(mei)處理的(de)(de)情況下，經(jing)(jing)Giemsa染(ran)色(se)，所呈(cheng)現(xian)的(de)(de)是與G顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)著色(se)相(xiang)反的(de)(de)情況，故又(you)稱反帶(dai)(dai)；Q顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)，指(zhi)熒光顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)，同G顯(xian)(xian)帶(dai)(dai)帶(dai)(dai)紋。

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DNA 指紋(wen)圖譜技術（DNA-Fingerprinting）由(you)英國科學家(jia) Jeffreys 于 1986 年開(kai)發，是具有完(wan)全個(ge)體特異的DNA多態(tai)性圖譜(pu)，其個體識別能力足以與手指指紋相媲美，因而得名。DNA 指紋圖譜技術具有快速、準確等優點，是鑒別品種、品系的有力工具，已廣泛應用于很多作物的品種資源多樣性和純度鑒定研究。

其中(zhong)SSR(simple sequence repeat)和(he)SNP（single nucleotide polymorphism）分子(zi)標(biao)記(ji)已(yi)被國(guo)(guo)際植(zhi)物新品種(zhong)權保護(hu)聯盟(UPOV)BMT分子(zi)測試指(zhi)(zhi)南和(he)國(guo)(guo)內《植(zhi)物品種(zhong)鑒定DNA指(zhi)(zhi)紋方法(fa)總(zong)則(ze)》（NY/T2594-2016）定為優先推薦的兩種(zhong)標(biao)記(ji)方法(fa)。

相較于傳統的分子標記，SNPs在基因組中更豐富，具有數量(liang)大、基(ji)因(yin)組分(fen)(fen)布(bu)廣(guang)、穩定(ding)(ding)性和遺傳(chuan)力高、鑒(jian)定(ding)(ding)簡單等優(you)點，可用于(yu)快速、高通(tong)量(liang)的基(ji)因(yin)分(fen)(fen)型分(fen)(fen)析。構建基于SNP標記技術的DNA指紋圖譜對于品種特異性和真實性鑒別具有重要意義。

DNA條形碼分子鑒定法是利用基因(yin)組中一段(duan)公認的、相(xiang)對較短的DNA序列來進行物種鑒(jian)定的一種分子生物學技術。由加拿大動物學家Paul Hebert首次提出，其團隊對動物界包括脊椎動物和無脊椎動物共11門13320個物種的細胞色素C氧化酶I基因（cytochrome Coxidase I gene）基因序列比較分析，發現98%的物種遺傳距離差異在種內0%-2%，種間平均可達到11.3%，據此提出可以用單一的小片段基因來代表物種。

由于細(xi)胞(bao)色素(su)C氧(yang)化酶I基(ji)(ji)因（cytochrome Coxidase I gene）和細(xi)胞(bao)色素(su)B線粒體基(ji)(ji)因序列在(zai)種(zhong)屬(shu)(shu)內高度保守，而在(zai)種(zhong)屬(shu)(shu)間差(cha)異較大(da)，針對不同種(zhong)屬(shu)(shu)設計特(te)異性引物(wu)，每一(yi)個種(zhong)屬(shu)(shu)都能擴(kuo)增(zeng)出一(yi)個特(te)定(ding)大(da)小的片段。可(ke)采用瓊脂糖凝膠電泳方法(fa)檢(jian)測擴(kuo)增(zeng)產物(wu)，并進一(yi)步測序，以(yi)此作為細(xi)胞(bao)種(zhong)屬(shu)(shu)鑒別和交叉污染檢(jian)測的的依據。

DNA條形碼技術具有檢(jian)測(ce)樣(yang)(yang)本范圍大、準確性高、可快速鑒定大量樣(yang)(yang)本等優點，是傳統形態鑒別方法的有效補充。

武漢珈創生物技術股份有限公司，創建于2011年，是一家集生物技術服務與研發為一體的高新技術企業，專注于為生物藥品/制品的生產企業及研發機構提供各(ge)類細胞(bao)(bao)(bao)（含重組(zu)細胞(bao)(bao)(bao)、干細胞(bao)(bao)(bao)、免疫細胞(bao)(bao)(bao)等）及(ji)原(yuan)輔料的質量檢測、病毒清(qing)除工藝驗證(zheng)技(ji)術服務。

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