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發(fa)布時間：2023-04-04 10:39 信息來源： 閱讀次(ci)數： 次(ci)
CAR-T細胞療法
免疫細胞療法廣泛應用于臨床，尤其是惡性腫瘤，是指采集人體自身免疫細胞，經過體外改造、培養，使其數量擴增或增加其靶向殺傷能力，然后再回輸到患者體內，達到殺滅血液及組織中病原體、腫瘤細胞的目的。
CAR-T細胞治療技術因其安全性和廣泛適用性，成為近年來一種發展較快的抗腫瘤治療技術，但實際應用中，以逆轉錄病毒或慢病毒為載體的CAR-T細胞治療產品，也仍然存在一定安全隱患，其主要原因在于，作為載體的逆轉錄病毒或慢病毒仍有可能產生具體有復制能力的病毒，即產生復制性逆轉錄病毒（replication competent retroviruses，RCR）或產生復制性慢病毒（replication competent lentivirus, RCL）。
潛在風險
逆轉錄病毒載(zai)(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)和慢病毒載(zai)(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)均(jun)為復(fu)制缺陷型(xing)載(zai)(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)，但在病毒載(zai)(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)生產過程(cheng)中因穿梭載(zai)(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)、包裝載(zai)(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)及(ji)包裝細胞中的(de)內源性逆轉錄元件(jian)之間，或病毒載(zai)(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)與免疫細胞的(de)內源性逆轉錄元件(jian)之間發生同源或非同源重組，會導(dao)致(zhi)可復(fu)制慢病毒(replication competent lentivirus，RCL)產生(sheng)。鑒于RCL潛在(zai)的威脅(xie)，FDA及歐盟先(xian)后(hou)出臺了(le)相關文件，要求在(zai)生(sheng)產及應用的不同階段(duan)進行(xing)RCL的控制，包括生(sheng)產病毒的細(xi)(xi)胞庫、終(zhong)末細(xi)(xi)胞、病毒載體及轉導(dao)細(xi)(xi)胞，并(bing)對(dui)CAR-T細(xi)(xi)胞回輸(shu)后(hou)的患(huan)者個體進行(xing)監(jian)測。
現有技術中(zhong)，RCL的(de)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa)(fa)主要包括針對特定(ding)(ding)基因(yin)(yin)（如(ru)vsv-g基因(yin)(yin)、psi-gag基因(yin)(yin)）的(de)pcr法(fa)(fa)或(huo)qpcr法(fa)(fa)快檢(jian)技術以(yi)及敏(min)感(gan)細(xi)胞感(gan)染(ran)試(shi)驗(yan)法(fa)(fa)等。為了提高試(shi)驗(yan)的(de)靈(ling)敏(min)度，FDA推薦利(li)用(yong)(yong)以(yi)細(xi)胞培(pei)養為基礎的(de)感(gan)染(ran)性試(shi)驗(yan)進(jin)行RCL的(de)檢(jian)測(ce)，該(gai)方(fang)法(fa)(fa)首先將可能存在的(de)RCL在敏(min)感(gan)細(xi)胞上(shang)擴增(zeng)，并在培(pei)養終點(dian)利(li)用(yong)(yong)敏(min)感(gan)、快速的(de)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa)(fa)進(jin)行檢(jian)測(ce)。在細(xi)胞擴增(zeng)及指(zhi)示階段需設置陰性對照、陽(yang)性對照以(yi)及抑(yi)制對照組。陽(yang)性對照一般為減(jian)毒的(de)HIV-1，抑(yi)制對照是在供(gong)(gong)試(shi)品中(zhong)加入一定(ding)(ding)量的(de)減(jian)毒HIV-1，以(yi)排除實驗(yan)用(yong)(yong)量供(gong)(gong)試(shi)品可能會(hui)對C8166細(xi)胞的(de)生(sheng)長(chang)或(huo)感(gan)染(ran)產生(sheng)抑(yi)制而出現RCL假陰性結果。經過(guo)培(pei)養的(de)對照組及供(gong)(gong)試(shi)樣品最終采用(yong)(yong)ELISA法(fa)(fa)測(ce)定(ding)(ding)p24含量、PCR／Q-PCR法(fa)(fa)測(ce)定(ding)(ding)psi-gag和VSV-G序(xu)列(lie)、測(ce)定(ding)(ding)逆轉錄(lu)酶活性（PERT法(fa)(fa)）等方(fang)法(fa)(fa)檢(jian)測(ce)RCL。
珈創生物RCL檢測服務
珈創生物構建了HIV-1弱(ruo)毒質(zhi)粒，包(bao)裝了HIV-1弱(ruo)毒作為RCL實驗(yan)的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)病毒，并(bing)對(dui)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)與抑制對(dui)照(zhao)(zhao)中HIV-1弱(ruo)毒的添(tian)加量進(jin)行(xing)(xing)摸索(suo)，使用合適添(tian)加量，以驗(yan)證(zheng)反(fan)應體系的適用性(xing)，又能(neng)監測(ce)(ce)反(fan)應靈敏度。同(tong)時，對(dui)供(gong)試(shi)品(pin)(pin)（慢病毒終末細胞(bao)、慢病毒上(shang)清(qing)液、CAR-T轉導(dao)細胞(bao)）添(tian)加量也進(jin)行(xing)(xing)實驗(yan)，以確(que)保供(gong)試(shi)品(pin)(pin)不(bu)會明顯影響(xiang)C8166敏感(gan)細胞(bao)的增殖和感(gan)染。供(gong)試(shi)品(pin)(pin)在C8166細胞(bao)中經(jing)過(guo)擴增階段(duan)和指示階段(duan)的培養后(hou)，感(gan)染終點的細胞(bao)上(shang)清(qing)將(jiang)進(jin)行(xing)(xing)p24 Elisa檢(jian)測(ce)(ce)；同(tong)時細胞(bao)將(jiang)用來提取(qu)DNA，進(jin)行(xing)(xing)psi-gag和VSV-G基因(yin)qPCR檢(jian)測(ce)(ce)（引(yin)物探針由本公司自行(xing)(xing)設計）。本公司建立的RCL檢(jian)測(ce)(ce)方法(fa)經(jing)過(guo)方法(fa)驗(yan)證(zheng)，可滿足不(bu)同(tong)類型供(gong)試(shi)品(pin)(pin)的檢(jian)測(ce)(ce)需求。
后(hou)臺回復“RCL檢測(ce)”，咨詢相關服(fu)務。
生物制(zhi)品(pin)病毒安全性(xing)相關法規(gui)
中國
（5）體外基因修飾系統藥學研究與評價技術指導(dao)原則（試行）2022
美國
歐(ou)洲
珈創生物針對“RCL檢測”，正在(zai)拓展(zhan)相關(guan)檢(jian)測(ce)服(fu)務，歡(huan)迎新老客戶前(qian)來咨(zi)詢。
參考文獻(xian)：
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