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發(fa)布時(shi)間:2018-09-05 09:26 信息來源: 閱讀次數: 次
Exosome (外泌體)是(shi)活(huo)細胞(bao)分泌的(de)直徑約為 30-150 nm 的(de)膜性囊泡,天然存(cun)在于體液中,包括血液、唾液、尿(niao)液和母乳。Exosome 攜帶了包含細胞(bao)溶質(zhi)蛋(dan)白(bai)、 參與(yu)細胞(bao)內(nei)信號轉(zhuan)導的(de)蛋(dan)白(bai)、各種(zhong)代謝酶(mei)、熱休克蛋(dan)白(bai)和四跨膜蛋(dan)白(bai)及特殊(shu)蛋(dan)白(bai)質(zhi),參與(yu)細胞(bao)活(huo)動的(de)重要調控,有望成為多種(zhong)疾病的(de)早期診斷標志(zhi)物。 Exosome 在作為基因和藥物運載、腫(zhong)瘤腫(zhong)瘤和腫(zhong)瘤生物學研(yan)究方面已(yi)經成為熱點。
GSTM Exosome Isolation Reagent 是用于快(kuai)速高效地從血清(qing)血漿、細(xi)胞培(pei)養上清(qing)、腦脊液和(he)尿液中(zhong)提取(qu)(qu) exosome 的(de)(de)試劑盒,僅(jin)需通(tong)過簡單混勻和(he)常規離心(xin)即可(ke)從樣(yang)本中(zhong)獲(huo)取(qu)(qu)大量 結構(gou)完整的(de)(de) exosome,比傳統(tong)的(de)(de)超速離心(xin)法(fa)節省時間和(he)樣(yang)本。以 GSTMExosome Isolation Reagent 提取(qu)(qu)的(de)(de) exosome 可(ke)根據實(shi)驗(yan)目的(de)(de)用于后(hou)續多種(zhong)實(shi)驗(yan),應用范圍廣(guang)泛。
■ 優勢
1. 操(cao)作簡單,無需(xu)超速離(li)心(xin),省時省力;
2. 純度高(gao),富集量(liang)大,應用范圍(wei)廣;
3. 獲取(qu)的 Exosome 結構和功(gong)能完整;
4. 穩定(ding)性好,便(bian)于運輸,便(bian)于保存。
GSTM Exosome Isolation Kit(柱提(ti)式(shi))應用了柱提(ti)式(shi)的提(ti)取分離技(ji)術,一步法分離出血(xue)漿 / 血(xue)清(qing) / 細胞(bao)上清(qing)液中的外泌(mi)體,調節結合條件后,外泌(mi)體被(bei)吸附(fu)(fu)在柱子的膜(mo)上,而(er)雜質不被(bei)吸附(fu)(fu)而(er)去除。柱子經洗滌后去除雜質,最后洗脫出外泌(mi)體。得到的外泌(mi)體可用于 WB、質譜(pu)、QPCR 檢測、高通(tong)量(liang)測序(xu)等實驗。
■ 優勢
1. 操作簡易:不(bu)需要(yao)超速離心,分離時(shi)間小(xiao)于 1 小(xiao)時(shi);
2. 高得率:分離的外泌體(ti)顆粒(li)量可(ke)媲美超速離心;
3. 分離(li)高純度的外泌體:外泌體純度 >95%;
4. 分離的外泌(mi)體形態完整。
■ 本試(shi)劑盒(he)分離的(de)外泌(mi)體鑒定
根據國(guo)際細(xi)胞外囊(nang)泡協(xie)會于(yu) 2014 年(nian)發表的(de)(de)一個指導手冊(MISEV),鑒(jian)定(ding)外泌體首先需(xu)要通過 WB 來(lai)鑒(jian)定(ding)細(xi)胞外囊(nang)泡的(de)(de)標志蛋白是(shi)否存在于(yu)樣品中(zhong)(zhong),通過電(dian)子顯微鏡來(lai)觀察(cha)樣品中(zhong)(zhong)細(xi)胞外囊(nang)泡的(de)(de)形態特(te)征(zheng),通過 NTA 等手段來(lai)分(fen)析(xi)樣品中(zhong)(zhong)細(xi)胞外囊(nang)泡的(de)(de)群體特(te)征(zheng)(粒子濃度、直徑分(fen)布等)。
外泌體 WB 檢(jian)測(本試劑(ji)盒(he)與(yu) PEG 原理(li)的(de)試劑(ji)盒(he)對比(bi))
Western Blot 進行外泌體(ti)鑒(jian)定,CD9 條帶(dai)清晰(xi)可見(jian)。本試劑盒提(ti)取(qu)的外泌體(ti)蛋白檢(jian)測條帶(dai)單一(yi),純度比 PEG 原(yuan)理的提(ti)取(qu)試劑盒更高。
外泌(mi)體電(dian)鏡檢測(ce)
電鏡結果(guo)顯示,外(wai)泌(mi)體呈囊泡狀,粒徑大小(xiao)約為 120 nm,與文獻中報道的 30-150 nm 一致(zhi)。
外(wai)泌體粒徑檢測
Nanosight 進行粒徑檢測,粒徑均一,平均粒徑為 128 nm ,與文獻報道相符。