做(zuo)過細胞(bao)轉染(ran)的朋友，可能都有面臨過這(zhe)樣的尷尬：效率非常低(di)。

HighGene 轉染(ran)試劑是一種新型高效的陽(yang)離(li)子聚合物。它可以與核(he)(he)酸(suan)（包括質粒、siRNA、寡聚核(he)(he)苷酸(suan)）相互作(zuo)用形成一種復合物將核(he)(he)酸(suan)轉運(yun)到真(zhen)核(he)(he)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)內，適(shi)用于大部分真(zhen)核(he)(he)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)的細(xi)胞(bao)(bao)(bao)轉染(ran)，對于貼壁(bi)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)和懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)轉染(ran)同樣(yang)適(shi)用。組分經過改良優化，性(xing)(xing)質穩(wen)定，重(zhong)復性(xing)(xing)好，細(xi)胞(bao)(bao)(bao)毒性(xing)(xing)很(hen)低，轉染(ran)后無需更換細(xi)胞(bao)(bao)(bao)培養液。

貼壁細胞轉染(ran)

（以 HEK293T 細胞為例）

1. 第一天，將 HEK293T 細(xi)胞接(jie)種到 24 孔(kong)板中，細(xi)胞密度控制在 50%-70% 為宜；（注：根據實驗需求，可以選(xuan)擇不(bu)同的細(xi)胞培養(yang)裝置）

2. 第二(er)天，取 1 μg 質(zhi)粒加入到盛(sheng)有(you) 50 μL 無(wu)血清(qing)(qing) DMEM 基礎培(pei)養基離心管中，標記為(wei) A 液；取 2 μL HighGene 轉(zhuan)染試劑(ji)加入到另一個盛(sheng)有(you) 50 μL 無(wu)血清(qing)(qing) DMEM 基礎培(pei)養基離心管中，標記為(wei) B 液；（注(zhu)：MEM、1640、F12 等基礎培(pei)養基均可用于 HighGene 轉(zhuan)染試劑(ji)的溶劑(ji)）

3. 將 50 μL 含有(you) HighGene 轉染試劑 B 液(ye)(ye)滴(di)加到(dao) 50 μL 含有(you)質粒 A 液(ye)(ye)中，用移液(ye)(ye)槍輕輕吹打幾次混勻，室溫(wen)靜置 15～20 分鐘(zhong)；

4. 將(jiang) 100 μL HighGene 轉染試劑 / 質粒復(fu)合(he)物均(jun)勻滴(di)加到 24 孔(kong)細胞培(pei)養板孔(kong)中，輕(qing)輕(qing)搖(yao)動細胞培(pei)養板使其均(jun)勻分布；

5. 細胞轉染 4～6 小時后，更換(huan)新鮮完全培養基(ji)；（可選）

6. 細(xi)胞(bao)轉染 24～48 小時后，即可使用適當方式進行檢(jian)測(ce)，如 RT-PCR、Western、ELISA、報告基因等，或加入相應篩選藥物（G418 或 Puromycin）獲得穩定細(xi)胞(bao)株

懸浮細胞(bao)轉染(ran)

（以 HEK293F 細胞為(wei)例）

1. 第一(yi)天(tian)，將 HEK293F 細胞(bao)接種 30 mL 細胞(bao)懸液到 125 mL 搖瓶中，細胞(bao)密(mi)度控制(zhi)在(zai)（1.0-1.5）×106 為宜(yi)；

2. 第(di)二天，取(qu) 30 μg 質粒加入(ru)到盛(sheng)有 1.5 mL DMEM 基礎培(pei)(pei)養基離心管中，標記為 A 液(ye)；取(qu) 60 μL HighGene 轉染試劑加入(ru)到另一(yi)個盛(sheng)有 1.5mL DMEM 基礎培(pei)(pei)養基離心管中，標記為 B 液(ye)；

3. 將 1.5 mL 含(han)有 HighGene 轉染試劑 B 液滴加(jia)到 1.5 mL 含(han)有質(zhi)粒 A 溶(rong)中(zhong)，用移液槍(qiang)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)幾次混勻(yun)，室溫靜置 15～20 分鐘；

4. 將 3 mL HighGene 轉染試劑 / 質(zhi)粒復合(he)物均勻滴加(jia)到盛有 30 mL HEK293F 懸浮細胞的 125 mL 搖瓶中，輕輕搖動搖瓶使(shi)其混合(he)均勻；

5. 細胞(bao)轉染 5 天后，根據蛋白表達的情況（胞(bao)內表達或(huo)分泌表達），收集細胞(bao)或(huo)細胞(bao)培(pei)養上清，進行(xing)后續蛋白純化操作

注意事項

1. 轉染(ran)前(qian)細胞(bao)應(ying)處(chu)于良好的生長狀態（對數生長期為佳），推薦細胞(bao)傳(chuan)代后 12～24 小時(shi)內、細胞(bao)密度為 60～70% 時(shi)進行(xing)轉染(ran)；

2. 使用高質量(liang)的質粒有利于獲(huo)得較高的轉染(ran)效率，推薦(jian)使用無內毒素質粒抽(chou)提試劑盒抽(chou)提質粒；

3. 在細胞轉染實驗(yan)中，根據細胞轉染效率可適當調整質粒(li)與轉染試(shi)(shi)劑的(de)用(yong)量比例(li)，一般質粒(li)的(de)量（μg）與 HighGene 轉染試(shi)(shi)劑劑量（μL）使用(yong)比例(li)在 1:1～1:4 之間，推(tui)薦比例(li)為 1:2

HighGene 轉染(ran)試劑檢測圖片

在 6 孔(kong)細(xi)胞板(ban)中分(fen)別接種(zhong) 293T、HCT116、C6 三種(zhong)細(xi)胞，細(xi)胞密度為 60% 左右，分(fen)別使(shi)用 HighGene 轉染(ran)試劑和兩種(zhong)市面(mian)同類產品進行細(xi)胞轉染(ran)，GFP 真核表達質粒用量均為 2 μg，細(xi)胞轉染(ran) 48 小(xiao)時(shi)后，在熒光(guang)顯微鏡下觀察并(bing)拍照。

在(zai) 6 孔(kong)細胞(bao)(bao)板(ban)中接種 293T 和 HeLa 細胞(bao)(bao)，細胞(bao)(bao)密度(du)為 60% 左右，使(shi)用 HighGene 轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試劑進(jin)行細胞(bao)(bao)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)，GFP 真核(he)表達質(zhi)粒(li)用量為 2 μg，細胞(bao)(bao)轉(zhuan)(zhuan)染(ran) 48 小時后，在(zai)熒光顯微鏡(jing)下觀察并拍照(zhao)。

在 125 mL 搖瓶(ping)中接(jie)種 30mL 密(mi)度為(wei) 1 x106 HEK293F 懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)，使用 HighGene 轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)劑進行細(xi)胞(bao)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)，GFP 真核表達質粒用量為(wei) 30 μg，細(xi)胞(bao)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran) 48 小時后(hou)，在熒光顯(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)并(bing)拍(pai)照。

在(zai) 6 孔(kong)細胞板中接種 293T 細胞，細胞密度為 60% 左右，使用 HighGene 轉染(ran)試劑進行細胞轉染(ran)，GFP 真核表達質(zhi)粒用量為 2 μg，細胞轉染(ran) 16、36、48 小時后，在(zai)熒光顯(xian)微鏡下觀察并拍照(zhao)。