前言

近年來，DNA 重組技(ji)術(shu)在醫(yi)藥領域的(de)飛速(su)發展，使得采用(yong)哺乳動(dong)物(wu)細胞(bao)表達系統的(de)生物(wu)制品藥物(wu)逐漸(jian)成為主流，而對于此技(ji)術(shu)的(de)主要原材料---細胞(bao)系和其(qi)他原料的(de)檢定(ding)要求也日趨嚴格。

隨(sui)著(zhu)質(zhi)量(liang)源于(yu)設(she)計（QbD）理(li)(li)念(nian)越(yue)來越(yue)廣(guang)泛的(de)(de)(de)得到認可，意味著(zhu)僅僅依靠檢測終產品(pin)來保證(zheng)藥品(pin)質(zhi)量(liang)是遠(yuan)遠(yuan)不(bu)夠(gou)的(de)(de)(de)，這(zhe)個理(li)(li)念(nian)和(he)生物制品(pin)一(yi)直堅持的(de)(de)(de)全(quan)過程質(zhi)量(liang)控(kong)制的(de)(de)(de)基(ji)本方針是基(ji)本一(yi)致的(de)(de)(de)。基(ji)于(yu)這(zhe)一(yi)理(li)(li)念(nian)，把(ba)控(kong)生產用細胞的(de)(de)(de)構建、鑒定，以及細胞庫的(de)(de)(de)建立和(he)管(guan)理(li)(li)，能(neng)夠(gou)從源頭(tou)上保證(zheng)產品(pin)質(zhi)量(liang)的(de)(de)(de)穩定。

2015年(nian)版《中國藥典》三部“生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)制(zhi)品(pin)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)用動物(wu)(wu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)制(zhi)備及檢(jian)(jian)定規(gui)程”中，對于生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)用細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)基質(zhi)的(de)(de)質(zhi)量控制(zhi)提出了要求。對于生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)用細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，需要建立細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)庫，細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)庫的(de)(de)建立可為生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)制(zhi)品(pin)的(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)提供檢(jian)(jian)定合格，質(zhi)量相同，能持續穩定傳代的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。在細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)庫建立之后，應至少對MCB和(he)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)終(zhong)末(mo)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)進行(xing)一次(ci)全面檢(jian)(jian)定。當(dang)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)工藝(yi)發生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)改變時，還(huan)應重新對生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)終(zhong)末(mo)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)進行(xing)全檢(jian)(jian)。細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)檢(jian)(jian)定主要包括以(yi)下幾(ji)個方面：細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)鑒別、外(wai)源因子和(he)內(nei)源因子的(de)(de)檢(jian)(jian)查、成瘤性/致(zhi)瘤性檢(jian)(jian)查等。細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)檢(jian)(jian)定的(de)(de)基本要求見下表：

細胞庫的檢(jian)定(ding)，對(dui)于(yu)保證細胞庫的質量和(he)為后續工(gong)藝提供(gong)穩定(ding)的合格的細胞尤為必要，此部分的工(gong)作(zuo)對(dui)生物(wu)制(zhi)品產品而言非常(chang)重要。在(zai)進行項目選(xuan)擇時，可參考《中國藥典》三部“生物(wu)制(zhi)品生產用(yong)動(dong)物(wu)細胞制(zhi)備及檢(jian)定(ding)規程”。

大多數生(sheng)物制品產品是有(you)活性的(de)，無法采用傳(chuan)統的(de)終(zhong)端滅菌工(gong)藝(yi)，因此在細胞(bao)庫(ku)建立和生(sheng)產的(de)各個階(jie)段都需要(yao)對(dui)無菌性進行檢(jian)定(ding)，其中分枝桿菌的(de)檢(jian)查是2015年版(ban)藥典新增(zeng)項目，檢(jian)定(ding)時應關注。

支原(yuan)體(ti)的(de)污染則是基(ji)礎研究和工業(ye)生(sheng)產中的(de)常(chang)見(jian)問題，據(ju)報道可能有高達87%的(de)細胞系發生(sheng)過支原(yuan)體(ti)污染，支原(yuan)體(ti)在光學顯微鏡(jing)下不(bu)可見(jian)，一般(ban)不(bu)引起培養(yang)物渾濁，因此支原(yuan)體(ti)污染一般(ban)很(hen)難察(cha)覺，支原(yuan)體(ti)檢(jian)測也(ye)十(shi)分必要。

感染(ran)性病毒顆粒(li)污染(ran)生物制品(pin)和(he)生物制品(pin)衍生產品(pin)是被(bei)廣(guang)泛關注的(de)(de)安全問(wen)題(ti)，對于(yu)(yu)細胞表達系統(tong)可能帶(dai)來(lai)的(de)(de)病毒污染(ran)問(wen)題(ti)世界(jie)各國(guo)均十(shi)分重視，ICH Q5A中規(gui)定(ding)(ding)了相應的(de)(de)技(ji)術(shu)要求（ICH關于(yu)(yu)“生物技(ji)術(shu)產品(pin)的(de)(de)病毒安全性評價”）。綜合以上因(yin)素對于(yu)(yu)病毒因(yin)子的(de)(de)檢(jian)(jian)查應該(gai)盡量充(chong)分全面。內外(wai)源病毒的(de)(de)檢(jian)(jian)定(ding)(ding)應充(chong)分考慮(lv)細胞的(de)(de)特性，傳代歷史，培養過程等因(yin)素。例(li)如：

作(zuo)為單克隆(long)抗體等生物制劑最常(chang)用的(de)(de)生產用細(xi)(xi)胞系(xi)，中國(guo)倉鼠卵巢細(xi)(xi)胞(CHO)和(he)小鼠NS0和(he)Sp2/0等細(xi)(xi)胞系(xi)，由于其細(xi)(xi)胞來源(yuan)的(de)(de)供體或細(xi)(xi)胞取材的(de)(de)原因，需(xu)要關注其特定種(zhong)屬（鼠源(yuan)）病毒的(de)(de)檢查。

對于細胞建庫(ku)過程中使(shi)用過動(dong)(dong)物來源的(de)(de)原(yuan)料：如牛血清，或胰蛋白(bai)酶（豬(zhu)），還需對特定(ding)的(de)(de)動(dong)(dong)物來源的(de)(de)病毒進行檢(jian)定(ding)。

另(ling)外，2015版《中國(guo)藥(yao)(yao)典》三部的主要(yao)變化還(huan)有，新增(zeng)了“人(ren)(ren)用(yong)(yong)(yong)重組(zu)DNA蛋(dan)白制品總論(lun)(lun)(lun)”和(he)“單(dan)克隆(long)抗體類(lei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)治(zhi)療藥(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)總論(lun)(lun)(lun)”這兩個總論(lun)(lun)(lun)的制定為(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)制品藥(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)的研(yan)發和(he)質(zhi)量控制提(ti)供了通用(yong)(yong)(yong)的指導原則。其中“人(ren)(ren)用(yong)(yong)(yong)重組(zu)DNA蛋(dan)白制品總論(lun)(lun)(lun)”對于(yu)連續培養的生(sheng)(sheng)產方(fang)(fang)式，要(yao)求應(ying)對收(shou)獲(huo)(huo)階(jie)(jie)段的微生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)污染(ran)進行常規(gui)檢測；“單(dan)克隆(long)抗體類(lei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)治(zhi)療藥(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)總論(lun)(lun)(lun)”則提(ti)出：細(xi)胞培養和(he)收(shou)獲(huo)(huo)可采用(yong)(yong)(yong)限定細(xi)胞傳(chuan)代，單(dan)次(ci)(ci)收(shou)獲(huo)(huo)產物(wu)(wu)(wu)(wu)的方(fang)(fang)式；也可采用(yong)(yong)(yong)限定細(xi)胞傳(chuan)代時間(jian)，連續傳(chuan)代多次(ci)(ci)收(shou)獲(huo)(huo)的方(fang)(fang)式。而對于(yu)兩種方(fang)(fang)式的收(shou)獲(huo)(huo)階(jie)(jie)段都有相關的規(gui)定，每次(ci)(ci)收(shou)獲(huo)(huo)后均應(ying)檢測抗體含量，細(xi)菌內毒素及支原體。對于(yu)限定細(xi)胞傳(chuan)代次(ci)(ci)數的生(sheng)(sheng)產方(fang)(fang)式，需要(yao)采用(yong)(yong)(yong)適當的體外方(fang)(fang)法，對3次(ci)(ci)收(shou)獲(huo)(huo)物(wu)(wu)(wu)(wu)進行外源病(bing)毒的檢測。