珈創生(sheng)物 —— 生(sheng)物技術(shu)服務與研發為一體的高新技術(shu)企(qi)業
優質高效(xiao)透明
High quality, efficient and transparent
1、服務信息（簡介）
珈(jia)創生物病(bing)毒(du)清除(chu)工藝(yi)驗證(zheng)技術服務，為(wei)客戶提供定制的病(bing)毒(du)清除(chu)工藝(yi)驗證(zheng)服務，通(tong)過 Q-PCR 或感染(ran)性實(shi)驗對(dui)工藝(yi)處(chu)理前(qian)后樣(yang)品進行病(bing)毒(du)檢測和滴度分析，驗證(zheng)客戶下游工藝(yi)對(dui)病(bing)毒(du)的去除(chu)/滅活(huo)效果。
珈創(chuang)生(sheng)物擁有經(jing)過(guo)國家法(fa)檢認定的 BSL-2 實驗(yan)室，珈創(chuang)生(sheng)物病毒清(qing)除工藝(yi)驗(yan)證具備CMA及(ji)CNAS雙認證；實驗(yan)室配套(tao)多(duo)臺生(sheng)物安全(quan)柜、AKTA 純(chun)化儀、納濾(lv)過(guo)濾(lv)設(she)備、超速離心機等設(she)備，可開(kai)展(zhan)低 pH 孵育、熱處理/巴氏消毒、S/D 處理、柱(zhu)層(ceng)析(xi)（親和(he)層(ceng)析(xi)、陰(yin)離子交換層(ceng)析(xi)和(he)疏水層(ceng)析(xi)等）和(he)納米膜過(guo)濾(lv)等多(duo)種工藝(yi)的病毒清(qing)除工藝(yi)驗(yan)證。行業(ye)經(jing)驗(yan)豐富，累計完成(cheng)數百起病毒清(qing)除工藝(yi)驗(yan)證項目(mu)。
珈創生(sheng)物(wu)(wu)(wu)病(bing)毒(du)清除工(gong)藝驗證平臺團(tuan)隊負責人(ren)為武漢大學微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)學博(bo)士，具(ju)備豐富的病(bing)毒(du)學、細胞生(sheng)物(wu)(wu)(wu)學和(he)(he)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)學基礎和(he)(he)科研(yan)經(jing)(jing)歷，多年專(zhuan)注于細胞檢測和(he)(he)病(bing)毒(du)清除工(gong)藝驗證項目開(kai)展(zhan)和(he)(he)優化(hua)。專(zhuan)業(ye)團(tuan)隊擁(yong)有十年以上的從業(ye)經(jing)(jing)驗，通過不斷優化(hua)技術體系，提高(gao)指示病(bing)毒(du)滴度和(he)(he)純度以滿足法(fa)規和(he)(he)客(ke)戶的需求。團(tuan)隊核(he)心(xin)成員(yuan)具(ju)有扎實的生(sheng)物(wu)(wu)(wu)醫學、藥學等相(xiang)關專(zhuan)業(ye)背景，具(ju)備5 年以上的病(bing)毒(du)清除工(gong)藝驗證從業(ye)經(jing)(jing)驗。
近年(nian)來，珈(jia)創生物已向國(guo)內數百(bai)家生物藥企業(ye)提供(gong)國(guo)內外(wai)病(bing)毒清除工藝驗證(zheng)技術服務(wu)，兼顧國(guo)內與國(guo)外(wai)的法規要(yao)求(qiu)差異，根據客戶需求(qiu)，提供(gong)全(quan)面合理的驗證(zheng)方案，并提供(gong)權威(wei)的檢測報(bao)告，為企業(ye)在(zai)工藝開發(fa)、新藥臨床試驗申報(bao)（IND）及(ji)生物制品許(xu)可申請(qing)（BLA）保駕護(hu)航，取得了良好的社(she)會效(xiao)益(yi)和經濟效(xiao)益(yi)。
2、法規依據
《生(sheng)物(wu)制(zhi)品(pin)病毒(du)安全(quan)性控制(zhi)》中華人民共和國藥(yao)典(dian)，2020年版，三部，生(sheng)物(wu)制(zhi)品(pin)通則
《血液制品去除/滅(mie)活病毒技術方(fang)法及驗證指導原則》國藥監注[2002]160號(hao)
《生物組織(zhi)提取(qu)制(zhi)品(pin)(pin)和真核細胞表達制(zhi)品(pin)(pin)的病毒安(an)全性評(ping)(ping)價技術審評(ping)(ping)一般原則》國家食(shi)品(pin)(pin)藥品(pin)(pin)監督管理(li)局(ju)編號：[S]GPH3-1，2005 年 12 月
《動物源性(xing)醫療器械病毒滅活/去除(chu)有效(xiao)性(xing)驗證的(de)原則》國家食品(pin)藥品(pin)監(jian)督管理局關于(yu)發布動物源性(xing)醫療器械注(zhu)冊技術審查指導原則的(de)通(tong)告（2017 年第(di) 224 號）
Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived From Cell Lines of Human or Animal Origin. 1999. ICH Q5A（R1）
Design, Evaluation, and Characterization of Viral Clearance Procedure.2016. USP General Chapter: <1050.1>
3、 指示病毒選擇(ze)
指示病(bing)(bing)(bing)毒(du)可(ke)(ke)分為“相(xiang)關”病(bing)(bing)(bing)毒(du)（如(ru)(ru)人(ren)血(xue)液制品(pin)可(ke)(ke)能(neng)攜帶的(de)人(ren)類病(bing)(bing)(bing)毒(du) HAV、HBV、HIV 和 B19 等(deng)）、特(te)異(yi)“模型”病(bing)(bing)(bing)毒(du)（如(ru)(ru) CHO 表達(da)系統(tong)的(de) MVM、x-MuLV 病(bing)(bing)(bing)毒(du)，桿狀病(bing)(bing)(bing)毒(du)表達(da)系統(tong)的(de) BV 病(bing)(bing)(bing)毒(du)等(deng)）和非特(te)異(yi)“模型”病(bing)(bing)(bing)毒(du)（如(ru)(ru) CHO 表達(da)系統(tong)的(de) PRV 和 Reo3 病(bing)(bing)(bing)毒(du)）三類，應(ying)優先選擇與潛在(zai)污染(ran)病(bing)(bing)(bing)毒(du)密切相(xiang)關的(de)病(bing)(bing)(bing)毒(du)，如(ru)(ru)相(xiang)關病(bing)(bing)(bing)毒(du)不能(neng)獲取或不適于體(ti)外培養，可(ke)(ke)采用特(te)異(yi)“模型”病(bing)(bing)(bing)毒(du)代(dai)替(ti)。
評價病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)清除(chu)的總能力時，應選(xuan)擇具有不同特性的非特異性模(mo)型病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)，包括(kuo) DNA/RNA、有/無包膜(mo)、顆粒(li)大小(xiao)、尤(you)其對物(wu)理/化學處理明顯耐受的病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)等(deng)指(zhi)(zhi)示(shi)病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)需有足夠高的滴度(du)，同時所(suo)選(xuan)指(zhi)(zhi)示(shi)病(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)不能對操作人(ren)員和環境造成生物(wu)危害(hai)。
驗證平臺擁有豐(feng)富的病毒毒種毒株，且背景清(qing)楚，純度高，滴(di)度可(ke)達 8~9Log10/ml。表 1 列出(chu)了 CHO 表達制品(pin)工藝驗證最(zui)常用四種指示病毒：
表 1 病毒清除工藝驗證中常用指示病毒性質
| 病毒名稱 |
病毒特性 |
檢測方法 |
病毒滴度 Log10/ml |
|
Reo3（呼(hu)腸孤(gu)病毒） |
雙(shuang)鏈 RNA 病毒，無(wu)包膜(mo)，抗性中(zhong)50-70nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
MVM（鼠細小病毒 ） |
單鏈 DNA 病毒無包膜，抗(kang)性極高(gao)
18-26nm
|
TCID50 Q-PCR |
8.5-9.5 |
| PRV(偽狂病毒) | 雙鏈 DNA 病毒有包膜(mo)，抗性中120-200nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
|
MuLv （鼠白血病(bing)(bing)病(bing)(bing)毒） |
單鏈(lian) RNA 病毒有包膜，抗性(xing)低 80-120nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
|
BV (桿狀(zhuang)病毒) |
雙鏈 DNA病毒有包膜(mo) 45×275nm |
TCID50 |
8-9 |
|
POL-1 (人脊髓灰質炎I型病(bing)毒(du)) |
單鏈 RNA 病毒無包膜，抗性中 25-30nm |
TCID50 |
8-9 |
|
VSV (水皰性口炎(yan)病毒) |
單鏈 RNA 病毒有包(bao)膜，抗性低(di) 70×150nm |
TCID50 Q-PCR |
8-9 |
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PPV （豬細(xi)小病毒） |
單(dan)鏈(lian) DNA 病毒無包膜，抗性(xing)高 18-24nm |
TCID50 Q-PCR |
7.5-8.5 |
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HAdV-5
(人腺(xian)病(bing)毒5型) |
雙鏈 DNA 病毒(du)無包膜(mo)，抗性低(di)
70-90nm |
TCID50 |
8.5-9.5 |
|
BPIV-3 （牛副流感(gan)病(bing)毒3型） |
單鏈(lian) RNA 病毒有包膜，抗(kang)性低 150-200nm |
TCID50 |
8-9 |
4、病毒清除工藝驗證方案
2020 年(nian)(nian) 1 月(yue)(yue) 21 日(ri)(ri)，國(guo)家藥品監督管理局（簡稱：NMPA）發(fa)布(bu) “國(guo)家藥監局關于適用(yong)(yong)《Q2（R1）：分析方法論(lun)證：正文和方法學》 等(deng) 11 個(ge)國(guo)際(ji)人用(yong)(yong)藥品注冊(ce)技術(shu)協調會指(zhi)導(dao)原(yuan)則的(de)公告（2020 年(nian)(nian)第 7 號）”。公告明(ming)確：本公告發(fa)布(bu)之日(ri)(ri)起 6 個(ge)月(yue)(yue)后（即：2020 年(nian)(nian) 7 月(yue)(yue) 10 日(ri)(ri)）開始的(de)藥學研究（以(yi)試驗(yan)記錄時間點為準(zhun)），適用(yong)(yong) ICH 指(zhi)導(dao)原(yuan)則, 其 中包含了(le) ICH Q5A (R1)和 Q5B。因此，目前人用(yong)(yong)單(dan)抗、蛋白藥物(wu)(wu)等(deng)生(sheng)物(wu)(wu)制(zhi)品的(de)病(bing)毒清除驗(yan)證國(guo)內(nei)外適用(yong)(yong)一套標準(zhun)和原(yuan)則，建議(yi)的(de)驗(yan)證方案 （CHO 表達系(xi)統）如下表所示(shi)：
表 2 目前建議的IND和BLA申報所需病毒清除工藝驗證總體方案
|
工藝 |
臨床Ι期（IND）
NMPA/EMA/UDFDA
|
臨床Ⅲ期后報產（BLA）
NMPA/EMA/UDFDA
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低 pH 孵育或 S/D 處理 |
1種病毒(du)（MuLV），重復2次實驗 |
2 種(zhong)病毒（MuLV，PRV），重(zhong)復2次實驗 |
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納米(mi)膜過濾 |
2種病毒（MuLV，MVM），重復(fu)2次實(shi)驗 |
4 種(zhong)病毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重復2次實驗 |
|
陰(yin)離子交換(huan)層析 |
2種病毒(du)（MuLV，MVM），重復2次實驗 |
4 種病毒(du)（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重復2次實驗，需(xu)評估舊填(tian)料的病毒(du)清(qing)除能力以及(ji)病毒(du)殘留 |
|
另外(wai)一(yi)種層析 |
可(ke)選 |
4 種病(bing)毒（MuLV，PRV，Reo3，MVM），重(zhong)復2次實驗(yan)，需評估舊(jiu)填料的病(bing)毒清除能力(li)以及(ji)病(bing)毒殘(can)留 |
病毒清除(chu)工藝驗(yan)證(zheng)案例展示
珈創生物已(yi)為數百家國內外生物企業提(ti)供專業，全(quan)面合理的病毒清除工藝驗證服(fu)務；評(ping)審(shen)通過率為100%；有(you)專業PM及時(shi)響應客(ke)戶需求，跟蹤項(xiang)目進(jin)度，服(fu)務貫穿(chuan)申(shen)報(bao)全(quan)程，提(ti)供合理化申(shen)報(bao)材料(liao)書寫建議等(deng)。
申報階段(duan)：IND
申報對象：國(guo)內外雙(shuang)申報
工藝及結果：
|
工藝步驟 |
去除/滅活指數(shu)（log10） |
||
|
X-MuLv |
MVM |
PRV |
|
|
低pH孵育 |
≥4.30±0.14 |
/ |
≥5.20±0.07 |
|
陰離子層析 |
≥5.05±0.00 |
≥5.9±0.35 |
/ |
|
納米膜(mo)過(guo)濾(lv) |
≥4.85±0.07 |
≥5.15±0.07 |
/ |
申報階段：BLA
申報對(dui)象(xiang)：國內申報
工(gong)藝及結(jie)果：
|
工藝步驟 |
去除/滅活指數（log10） |
||||
|
X-MuLv |
MVM |
PRV |
Reo3 |
||
|
低(di)pH孵育(yu) |
≥5.80±0.28 |
/ |
≥5.15±0.07 |
/ |
|
|
納米膜過濾 |
≥4.95±0.00 |
≥4.55±0.00 |
≥4.30±0.14 |
≥4.15±0.07 |
|
|
親和(he)層析 |
新填料 |
3.38±0.07 |
3.14±0.38 |
4.09±0.14 |
2.43±0.20 |
|
舊填料 |
3.48±0.07 |
3.14±0.38 |
4.09±0.51 |
2.29±0.16 |
|
|
陰(yin)離子層析 |
新(xin)填料(liao) |
4.30±0.00 |
4.19±0.07 |
4.70±0.07 |
4.64±0.07 |
|
舊填(tian)料(liao) |
4.35±0.00 |
4.33±0.10 |
4.66±0.29 |
4.50±0.14 |
|
